تولید پروتئین نوترکیب ارگوکونین و کاربرد آن در فیلم پلی‌لاکتیک اسید جهت کنترل آلودگی‌های قارچی آسپرژیلوس نایجر و پنی‌سیلیوم نوتاتیوم در شرایط آزمایشگاهی

سابقه و هدف: رشد قارچ ها، از مهم‌ترین دلایل فساد مواد غذایی است. استفاده از بسته بندی های فعال ضدمیکروبی، موجب افزایش ایمنی و ماندگاری مواد غذایی می شود. هدف این تحقیق، تولید ترکیب ضد قارچی (ارگوکونین) و کاربرد آن در فیلم پلی لاکتیک اسید جهت کاهش آلودگی های قارچی آسپرژیلوس نایجر و پنی سیلیوم نوتاتیوم بود. مواد و روش ها: جهت تولید پروتئین نوترکیب ارگوکونین، ژن هدف به وکتور بیانی pET21 وارد و وکتور نوترکیب پس از تکثیر در باکتری اشرشیاکلی DHα به باکتری  اشرشیاکلی BL21 (DE3) به عنوان میزبان بیان منتقل شد. بیان ژن با استفاده از روش هایSDS-PAGE، وسترن بلات و دات بلات بررسی شد. جهت تخلیص پروتئین نوترکیب، از ستون کروماتوگافی میل ترکیبی استفاده شد. فیلم های زیست-فعال پلی لاکتیک اسید به روش قالب گیری و افزودن مقادیر مختلف ارگوکونین (0، 0.25، 0.5 و 0.75 درصد) به محلول 4 درصد وزنی پلی-لاکتیک اسید تهیه شدند. جهت بررسی اثر ضدقارچی فیلم پلی لاکتیک اسید، از روش انتشار دیسک استفاده شد. یافته ها: ژن ارگوکونین با استفاده از آغازگرهای اختصاصی به خوبی تکثیر شد. بیان پروتئین نوترکیب با روش SDS-PAGE و تایید آن با دات بلات و وسترن بلات انجام شد. ترکیب ارگوکونین دارای اثر ضدقارچی روی هر دو قارچ بود. قطر هاله عدم رشد برای هر دو قارچ نیز، با افزایش غلظت ارگونین افزایش یافت. همچنین فیلم فعال، اثر ضد قارچی بیشتری روی قارچی پنی سیلیوم نوتاتیوم داشت. نتیجه گیری: ارگوکونین با جلوگیری از سنتز گلوکان در دیواره قارچ ها موجب نابودی آنها می شود. بنابراین فیلم پلی لاکتیک اسید حاوی ارگوکونینمی تواند به عنوان بسته بندی فعال ضد میکروبی جهت افزایش ایمنی مواد غذایی استفاده شود.